|
|
Studium profylaktického účinku glykoklastrů na modelu bakteriální adherence
Áčová, Andrea ; Hodek, Petr (vedoucí práce) ; Kubíčková, Božena (oponent)
Cystická fibróza (CF), jakožto autosomálně-recesivní dědičné onemocnění způsobené mutaci v CFTR genu, způsobuje poruchu iontového kanálu, vlivem které pacienti trpí množstvím zdravotních problémů. Nejzávažnější jsou komplikace spojené s respirační soustavou. Hromadění hustého hlenu a pozměněná glykosylace v plicích vedou ke zvýšené adherenci bakteriálních buněk, především Pseudomonas aeruginosa (PA) a Burkholderia cepacia komlex, k plicním epiteliálním buňkám pacientů s CF. Předkládaná práce se zaměřením na jeden z virulentních faktorů PA, lektin PA-IIL, studuje adherenci kontrolního kmene PA (PAK; ST 1763) pod vlivem anti-PA-IIL slepičích protilátek IgY a multivalentních glykokonjugátů na bázi fukosy k plicním epiteliálním buňkám odebraným od zdravé osoby (NuLi-1) a osoby s CF (CuFi-1). Před samotným studiem adherence byla ověřena přítomnost PA-IIL v používané kultuře PAK pomocí metody "Western Blotting" s následnou imunodetekcí. Pro kvantitativní vyhodnocení adherenčního testu byly plicní epiteliální i bakteriální buňky nejprve fluorescenčně označeny barvivy PKH. Výsledky spektrofluorimetrického měření po provedení adherenčního testu byly také porovnány s mikroskopickým pozorováním adherence PAK. Různé frakce slepičích anti-PA-IIL protilátek z vaječných žloutků vykazovaly odlišný vliv na míru...
|
|
|
Vývoj modelového systému pro studium bakteriální adheze na plicní epitel pacientů s CF
Nosková, Libuše ; Hodek, Petr (vedoucí práce) ; Švédová, Martina (oponent)
Cystická fibróza (CF) je geneticky podmíněné onemocnění nesoucí sebou řadu zdravotních komplikací. Hlavní komplikací je chronická kolonizace a infekce dýchacích cest pacientů specifickými mikroorganismy - zejména Pseudomonas aeruginosa. Právě infekce plic tímto mikroorganismem je nejčastější příčinou smrti pacientů s cystickou fibrózou. Ke kolonizaci dýchacích cest dochází prostřednictvím řady adhezivních struktur jako je například lektin PA-IIL. V současné době je nejpoužívanější terapií léčba antibiotiky, ale vzhledem ke vzniku rezistencí jsou hledány i jiné způsoby léčby. Jednou z možností je pasivní imunizace pacientů pomocí slepičích protilátek. Pro tento účel byly připraveny protilátky proti jedné z adhezivních struktur P. aeruginosa, proti rekombinantnímu lektinu PA-IIL. Tyto protilátky rozpoznávaly i nativní lektin Pa- IIL exprimovaný bakterií P. aeruginosa. Pro testování schopnosti protilátek zabránit adhezi bakterií na buňky plicního epitelu bylo třeba vyvinout vhodný modelový systém. Byly připraveny základní komponenty systému, epiteliální buňky a bakterie P. aeruginosa. Z dýchacích cest CF pacientů byly izolovány buňky 2 metodami - izolací přímo z tkáně a technikou "brushing". K vyhodnocení adhezních testů byl hledán vhodný objektivní způsob vyhodnocení založený na vizualizaci...
|
|
|
Studium potenciálu slepičích anti-peptidových protilátek jako prostředku profylaxe virových infekcí
Wojčíková, Lenka ; Hodek, Petr (vedoucí práce) ; Kubíčková, Božena (oponent)
V roce 2020 byla WHO vyhlášena celosvětová pandemie kvůli nemoci COVID-19, která je způsobovaná virem SARS-CoV-2. Tento vir využívá pro vstup do buňky navázání povrchového "spike" proteinu na ACE 2 receptor napadené buňky. Očkování se proto zaměřuje na navození produkce protilátek, které tuto vazbu inhibují. Alternativně je možno získat protilátky mimo hostitelský organismus a využít je jako prostředek pasivní imunizace proti nemoci COVID-19. Cílem práce proto bylo připravit slepičí protilátky, IgY, které by byly schopné bránit vazbě viru. Pro přípravu peptidových imunogenů byly vybrány vhodné sekvence aminokyselin ze struktury RBD domény S1 podjednotky viru SARS-CoV-2, která interaguje s ACE 2 receptorem. Syntetizované peptidy byly navázány na proteinový nosič KLH a vzniklým konjugátem byly imunizovány slepice. Následně byly vytvořené IgY izolovány z vaječného žloutku a za využití metody ELISA byla prokázána schopnost protilátek rozpoznat vybrané peptidy v různých typech antigenů. Poté byly ex vivo testovány protektivní vlastnosti protilátek proti viru v buněčných liniích a porovnány s účinností inhibice Remdesivirem. Protilátky byly při testech schopny inhibice vazby viru na buňky, ale výsledek testování byl ovlivněn nízkou počáteční koncentrací protilátek. Proto byla provedena afinitní...
|
|
|
Studium interakcí doplňků stravy s enzymy biotransformace xenobiotik
Bebová, Michaela ; Hodek, Petr (vedoucí práce) ; Hansíková, Hana (oponent)
V poslední době se věnuje stále větší pozornost chemopreventivním sloučeninám a to zejména fytochemikáliím, které jsou všeobecně považovány za zdraví prospěšné látky a to hlavně díky jejich přírodnímu původu. Velkou skupinu fytochemikálií představují flavonoidy, které jsou obsaženy v mnoha potravních doplňcích. Spotřeba těchto koncentrovaných zdrojů flavonoidů se v posledních letech dramaticky zvýšila. Užívání flavonoidních látek ve velkém množství však může být spojeno s některými nežádoucími účinky. Některé flavonoidy jsou známé modulátory enzymů I. a II. fáze biotransformace xenobiotik a jejich indukce může vést ke zvýšení aktivace karcinogenů. V rámci této diplomové práce byly zkoumány účinky vybraných flavonoidních sloučenin -naftoflavonu, -naftoflavonu, myricetinu a dihydromyricetinu a karcinogenů (BaP, PhIP) na enzymy II. fáze biotransformace, sulfotransferasy (SULT). Pro stanovení indukčního efektu byly připraveny protilátky pro jejich imunodetekci. Peptidické imunogeny, které byly vybrány z proteinových sekvencí potkaních sulfotransferas rSULT1A1, 1B1, 1C1, 1C2, 1C1/2, 1E1 a 2A1 byly použity ve formě KLH konjugátů pro imunizaci slepic za účelem získání antipeptidových protilátek (IgY) z vaječných žloutků. Frakce jednotlivých IgY byly izolovány jednoduchou extrakcí a následným vysrážením...
|
|
|
Development, characterization and use of anti-orphan cytochrome P450 antibodies
Hrdinová, Johana ; Hodek, Petr (vedoucí práce) ; Koblas, Tomáš (oponent)
Cytochromy P450 jsou důležité enzymy účastnící se metabolických pochodů, které využívají exogenní i endogenní látky jako substráty pro různé enzymatické reakce. Tyto enzymy mohou také jako substrát využít prekarcinogeny a aktivovat je na karcinogeny, což může vést k rozvoji rakoviny. Některé chemopreventivní látky mohou zvyšovat aktivitu cytochromů P450, a tím i riziko rozvoje rakoviny. Proto je důležité věnovat náležitou pozornost studiu mechanismu účinku těchto enzymů a vlivu chemopreventivních sloučenin na jejich aktivitu. mRNA exprese většiny isoforem cytochromů P450 je pozorovatelná ve zdravých (netransformovaných) tkáních, například játrech, mozku, srdci, tlustém střevě, ledvinách či placentě. Přesto existuje několik cytochromů P450, jejichž mRNA jsou v netransformovaných tkáních exprimovány málo, zatímco jejich exprese v transformovaných tkáních je znatelně vyšší. Jedním z takovýchto enzymů je CYP2W1, který může být použit jako prognostický marker kolorektální rakoviny - proto je užitečné mít schopnost detekovat přítomnost tohoto enzymu v různých tkáních. Detekce cytochromů P450 může být dosaženo metodou Western blot. V této metodě je imunodetekce provedena s využitím specifických protilátek. Pro tyto účely jsou nejčastěji používány savčí protilátky (IgG), ale protilátky izolované z...
|
|
|
Studium vlivu inhalačního podání IgY a Fab fragmentů z pohledu iniciace zánětu plic
Majerová, Barbora ; Hodek, Petr (vedoucí práce) ; Koblas, Tomáš (oponent)
Respirační systém je v nepřetržitém kontaktu s cizorodými agens z okolního prostředí, která se mohou stát iniciátory zánětlivých procesů. Mechanické bariéry a vzájemná vyváženost přirozené a získané imunity zajišťuje obranu před těmito činiteli bez vyvolání zánětlivé reakce. Za určitých okolností však může dojít k nadměrné aktivaci imunitního systému, která vede k produkci nejrůznějších zánětlivých cytokinů a mediátorů, např. faktorů TNF-α a GM-CSF nebo interleukinů IL-1ß a IL-6. Dýchací systém pacientů trpících cystickou fibrosou není schopen efektivní obrany před bakteriálními infekcemi. Vhodným prostředkem pro ochranu před oportunními patogeny by se mohly stát vaječné slepičí imunoglobuliny (IgY), jejichž zvláštností je to, že po vazbě na antigen neaktivují komplement. Jedním ze způsobů objasnění imunogenicity studované látky je expozice experimentálního zvířete a následné měření koncentrace produkovaných zánětlivých cytokinů. V této práci byl zjišťován potenciální zánětlivý vliv IgY a z nich připravených Fab fragmentů, které byly společně s ovalbuminem použity k dlouhodobé inhalační expozici potkanů kmene Wistar. Správný průběh inhalačního pokusu byl potvrzen imunochemickým stanovením sérových protilátek specifických proti inhalovanému proteinu. V získané plicní laváži a krevním séru byly...
|
|
|
Vývoj modelového systému pro studium bakteriální adheze na plicní epitel pacientů s CF
Nosková, Libuše ; Hodek, Petr (vedoucí práce) ; Švédová, Martina (oponent)
Cystická fibróza (CF) je geneticky podmíněné onemocnění nesoucí sebou řadu zdravotních komplikací. Hlavní komplikací je chronická kolonizace a infekce dýchacích cest pacientů specifickými mikroorganismy - zejména Pseudomonas aeruginosa. Právě infekce plic tímto mikroorganismem je nejčastější příčinou smrti pacientů s cystickou fibrózou. Ke kolonizaci dýchacích cest dochází prostřednictvím řady adhezivních struktur jako je například lektin PA-IIL. V současné době je nejpoužívanější terapií léčba antibiotiky, ale vzhledem ke vzniku rezistencí jsou hledány i jiné způsoby léčby. Jednou z možností je pasivní imunizace pacientů pomocí slepičích protilátek. Pro tento účel byly připraveny protilátky proti jedné z adhezivních struktur P. aeruginosa, proti rekombinantnímu lektinu PA-IIL. Tyto protilátky rozpoznávaly i nativní lektin Pa- IIL exprimovaný bakterií P. aeruginosa. Pro testování schopnosti protilátek zabránit adhezi bakterií na buňky plicního epitelu bylo třeba vyvinout vhodný modelový systém. Byly připraveny základní komponenty systému, epiteliální buňky a bakterie P. aeruginosa. Z dýchacích cest CF pacientů byly izolovány buňky 2 metodami - izolací přímo z tkáně a technikou "brushing". K vyhodnocení adhezních testů byl hledán vhodný objektivní způsob vyhodnocení založený na vizualizaci...
|
host ::
RSS.